Аналогичная ситуация может наблюдаться и с другим гормоном — тиреотропным гормоном (ТТГ). Бывает, что у пациента выявляется значительно повышенный уровень ТТГ, но при этом отсутствуют какие-либо симптомы гипотиреоза, как в момент обследования, так и в дальнейшем. Все остальные показатели функции щитовидной железы при этом остаются в пределах нормы.
Макро-ТТГ
Для определения истинного уровня биологически активного ТТГ необходимо отделить фракцию макро-ТТГ. «Золотым» стандартом диагностики является гель-фильтрационная хроматография (ГФХ, или эксклюзионная хроматография по размеру, SEC). Этот метод позволяет наиболее эффективно разделять макро-ТТГ от свободного ТТГ и других белков сыворотки по молекулярному размеру, обеспечивая максимально точное количественное определение макро-ТТГ. Однако из-за высокой стоимости и ограниченной доступности он используется преимущественно в научных исследованиях.
На практике чаще применяется стандартный иммунохимический тест, дополненный методом преципитации (осаждения) макромолекул и последующим расчетом их доли:
1. Проводится обычный анализ на ТТГ.
2. Если уровень ТТГ повышен, к образцу добавляется специальный преципитирующий агент (например, полиэтиленгликоль), который осаждает крупные иммунные комплексы, включая макро-ТТГ.
3. Сравниваются результаты измерения ТТГ до и после осаждения. В случае наличия значимого количества макро-ТТГ, уровень гормона после осаждения будет соответствовать нормальным значениям.
Подробнее о методах:
Гель-фильтрационная хроматография (ГФХ): Принцип метода основан на разделении молекул по их размеру и форме. Образец сыворотки пропускается через колонку, заполненную пористым матриксом (например, сефадексом или агарозой). Крупные молекулы, такие как макро-ТТГ (представляющий собой комплекс ТТГ с антителами или другими белками), не способны проникать в поры матрикса и поэтому элюируются быстрее. Меньшие молекулы, в частности мономерный, биологически активный ТТГ, проникают в поры и задерживаются дольше, элюируясь позднее. Это обеспечивает физическое разделение макро-ТТГ от свободного ТТГ и других белков сыворотки. После такого фракционирования по размеру каждая полученная фракция может быть проанализирована на содержание ТТГ с использованием стандартного иммунохимического анализа.
Иммунохимический анализ (ИХ) с ПЭГ-осаждением: Сам по себе иммунохимический анализ (например, ИФА — иммуноферментный анализ, или ИХЛА — хемилюминесцентный иммуноанализ) основан на специфическом связывании антител с антигеном (в данном случае, ТТГ) для его захвата и обнаружения. Однако в контексте диагностики макро-ТТГ, этот метод дополняется предварительным осаждением макромолекул с помощью полиэтиленгликоля (ПЭГ), как было описано выше, чтобы измерить только биологически активную фракцию ТТГ.
В нашей лаборатории используется метод преципитации с ПЭГ. С его помощью можно и первично выявить макро-ТТГ и мониторить значение ТТГ в динамике.